Denitrifikation
Denitrifikation är en mikrobiellt underlättad process där nitrat (NO3−) reduceras och i slutändan producerar molekylärt kväve (N2) genom en serie av mellanliggande gasformiga kväveoxidprodukter. Fakultativa anaeroba bakterier utför denitrifikation som en typ av andning som reducerar oxiderade former av kväve som svar på oxidationen av en elektrondonator som organiskt material .Denitrifikation sker mest vid suboxiska förhållanden, det vill säga vid pE-värden 3,4-8,5 när pH-värdet är 7. Vanligen sker denna reaktion i våtmarker, sjösediment eller vattenmättad åkermark.
De föredragna kväveelektronacceptorerna, i ordning av mest till minst termodynamiskt gynnsamma, är nitrat (NO3−), nitrit (NO2−), kväveoxid (NO), dikväveoxid (N2O), vilket slutligen resulterar i produktion av dikväve (N)2 ) slutför kvävecykeln. Denitrifierande mikrober kräver en mycket låg syrekoncentration på mindre än 10 procent, samt organiskt kol för energi. Eftersom denitrifikation kan ta bort NO3−, vilket minskar dess läckage till grundvatten, kan den strategiskt användas för att behandla avloppsvatten eller animaliska rester med hög kvävehalt. Denitrifikation kan läcka N2O, som är ett ozonnedbrytande ämne och en växthusgas, som kan ha stor inverkan på den globala uppvärmningen.
Processen utförs i första hand av heterotrofa bakterier (som Paracoccus denitrificans och olika pseudomonader),[1] även om autotrofa denitrifierare också har identifierats (till exempel Thiobacillus denitrificans).[2] Denitrifierare finns representerade i alla huvudfylogenetiska grupper.[3] I allmänhet är flera arter av bakterier involverade i den fullständiga reduktionen av nitrat till N2 och mer än en enzymväg har identifierats i reduktionsprocessen.[4] Denitrifieringsprocessen ger inte bara energi till organismen som utför nitratreduktion till dikvävegas, utan även vissa anaeroba ciliater kan använda denitrifierande endosymbionter för att få energi som liknar användningen av mitokondrier i syreandande organismer.[5]
Direkt reduktion från nitrat till ammonium, en process som kallas dissimilatorisk nitratreduktion till ammonium eller DNRA,[6] är också möjlig för organismer som har nrf-genen.[7][8] Detta är mindre vanligt än denitrifikation i de flesta ekosystem som ett sätt att reducera nitrat. Andra gener kända i mikroorganismer som denitrifierar är bland andra nir (nitritreduktas) och nos (dikväveoxidreduktas)[3] organismer som identifierats som att ha dessa gener är Alcaligenes faecalis, Alcaligenes xylosoxidans, många i släktet Pseudomona, Bradyrhizobium japonicum och Blastobacter denitrificans.[9]
Översikt
[redigera | redigera wikitext]Halva reaktioner
[redigera | redigera wikitext]Denitrifikation fortskrider i allmänhet genom någon kombination av följande halvreaktioner, med enzymet som katalyserar reaktionen inom parentes:
- NO3− + 2 H+ + 2 e− → NO2− + H2O (Nitratreduktas)
- NO2− + 2 H+ + e− → NO + H2O (Nitritreduktas)
- 2NO + 2H+ + 2 e− → N2O + H2O (Kväveoxidreduktas)
- N2O + 2 H+ + 2 e− → N2 + H2O (lustgasreduktas)
Hela processen kan uttryckas som en nettobalanserad redoxreaktion, där nitrat (NO3−) blir helt reducerat till dikväve (N2):
- 2NO3− + 10e− + 12H+ → N2 + 6H2O
Villkor för denitrifikation
[redigera | redigera wikitext]I naturen kan denitrifikation ske i både terrestra och marina ekosystem.[10] Vanligtvis sker denitrifikation i anoxiska miljöer, där koncentrationen av löst och fritt tillgängligt syre är utarmat. I dessa områden, nitrat (NO3−) eller nitrit (NO 2−) kan användas som en substitut terminal elektronacceptor istället för syre (O2), en mer energimässigt gynnsam elektronacceptor. Terminalelektronacceptor är en förening som reduceras i reaktionen genom att ta emot elektroner. Exempel på anoxiska miljöer kan vara jordar,[11] grundvatten,[12] våtmarker, oljereservoarer,[13] dåligt ventilerade hörn av havet och havsbottensediment. Dessutom kan denitrifikation förekomma i oxiska miljöer. Hög aktivitet av denitrifierare kan observeras i tidvattenzonerna, där tidvattencyklerna orsakar fluktuationer av syrekoncentrationen i sandiga kustsediment.[14] Till exempel ägnar sig bakteriearten Paracoccus denitrificans till denitrifikation under både oxiska och anoxiska förhållanden samtidigt. Vid syreexponering kan bakterierna använda dikväveoxidreduktas, ett enzym som katalyserar det sista steget av denitrifikation.[15] Aeroba denitrifierare är huvudsakligen Gram-negativa bakterier i phylum Proteobacteria. Enzymerna NapAB, NirS, NirK och NosZ finns i periplasman, ett brett utrymme kantat av cytoplasman och det yttre membranet i Gram-negativa bakterier.[16]
En mängd olika miljöfaktorer kan påverka graden av denitrifikation i en ekosystemomfattande skala. Till exempel har temperatur och pH observerats påverka denitrifieringshastigheten. I bakteriearten, Pseudomonas mandelii, reducerades uttrycket av denitrifierande gener vid temperaturer under 30 °C och ett pH under 5, medan aktiviteten i stort sett var opåverkad mellan ett pH på 6-8.[17] Organiskt kol som elektrondonator är ett vanligt begränsande näringsämne för denitrifikation som observerats i bentiska sediment och våtmarker.[18][19] Nitrat och syre kan också vara potentiellt begränsande faktorer för denitrifikation, även om det senare endast har en observerad begränsande effekt i våta jordar.[20] Syre påverkar sannolikt denitrifiering på flera sätt – eftersom de flesta denitrifierare är fakultativa, kan syre hämma hastigheter, men det kan också stimulera denitrifikation genom att underlätta nitrifikation och produktion av nitrat. I våtmarker såväl som öknar[21] är fukt en miljömässig begränsning av denitrifikationshastigheten.
Dessutom kan miljöfaktorer också påverka huruvida denitrifieringen fortsätter till fullbordan, kännetecknad av en fullständig reduktion av NO3- till N2 snarare än att frigöra N2O som en slutprodukt. Markens pH och textur är båda faktorer som kan dämpa denitrifikation, med högre pH-nivåer som driver reaktionen mer till fullbordan.[22] Näringssammansättningen, särskilt förhållandet mellan kol och kväve, är en starkt bidragande orsak till fullständig denitrifikation,[23] med ett förhållande på 2:1 av C:N som kan underlätta fullständig nitratreduktion oavsett temperatur eller kolkälla.[24] Koppar, som en kofaktor för nitritreduktas och dikväveoxidreduktas, främjade också fullständig denitrifikation när den tillsattes som ett komplement.[25] Förutom näringsämnen och terräng kan mikrobiell sammansättning också påverka förhållandet mellan fullständig denitrifikation, med prokaryota phyla Actinomycetota och Thermoproteota som orsak till större frisättning av N2 än N2O jämfört med andra prokaryoter.[26]
Denitrifikation kan leda till ett tillstånd som kallas isotopfraktionering i markmiljön. De två stabila isotoperna av kväve, 14N och 15N, finns båda i sedimentprofilerna. Den lättare isotopen av kväve, 14N, är att föredra under denitrifikationen, vilket lämnar den tyngre kväveisotopen, 15N, i restmaterialet. Denna selektivitet leder till anrikning av 14N i biomassan jämfört med 15N.[27] Dessutom kan den relativa mängden 14N analyseras för att skilja denitrifikation från andra processer i naturen.
Användning vid rening av avloppsvatten
[redigera | redigera wikitext]Denitrifikation används vanligtvis för att avlägsna kväve från spillvatten och kommunalt avloppsvatten. Det är också en instrumentell process i konstruerade våtmarker[28] och strandzoner[29] för att förhindra grundvattenförorening med nitrat till följd av överdriven användning av gödselmedel från jordbruket eller bostäder. [30] Träflisbioreaktorer har studerats sedan 2000-talet och är effektiva för att ta bort nitrat från avrinning från jordbruket[31] och även gödsel.[32] Reduktion under anoxiska förhållanden kan också ske genom process som kallas anaerob ammoniumoxidation (anammox):[33]
- NH4+ + NO2− → N2 + 2 H2O
I vissa avloppsreningsverk tillsätts föreningar som metanol, etanol, acetat, glycerin eller patentskyddade produkter till avloppsvattnet för att tillhandahålla en kol- och elektronkälla för denitrifiering av bakterier.[34] Den mikrobiella ekologin för sådana konstruerade denitrifikationsprocesser bestäms av elektrondonatorns natur och processdriftsförhållandena.[35][36] Denitrifikationsprocesser används också vid rening av industriellt avloppsvatten.[37] Många denitrifierande bioreaktortyper och -designer är tillgängliga kommersiellt för industriella tillämpningar, som elektro-biokemiska reaktorer (EBR), membranbioreaktorer (MBR) och bioreaktorer med rörlig bädd (MBBR).
Aerob denitrifiering, utförd av aeroba denitrifierare, kan erbjuda potentialen att eliminera behovet av separata tankar och minska slamavkastningen. Det råder mindre stränga alkalinitetskrav eftersom alkalinitet som genereras vid denitrifikation delvis kan kompensera för alkalinitetsförbrukningen vid nitrifikation.[16]
Ickebiologisk denitrifikation
[redigera | redigera wikitext]En mängd olika ickebiologiska metoder kan ta bort nitrat. Dessa är metoder som kan förstöra kväveföreningar, som kemiska och elektrokemiska metoder, och de som selektivt överför nitrat till en koncentrerad avfallsström, som jonbyte eller omvänd osmos. Kemiskt avlägsnande av nitrat kan ske genom avancerade oxidationsprocesser, även om det kan producera farliga biprodukter.[38] Elektrokemiska metoder kan ta bort nitrat genom en spänning som appliceras över elektroderna, med nedbrytning vanligtvis vid katoden. Effektiva katodmaterial är övergångsmetaller, postövergångsmetaller[39] och halvledare som TiO2. [40] Elektrokemiska metoder kan ofta undvika att kräva dyra kemiska tillsatser, men deras effektivitet kan begränsas av pH och närvarande joner. Omvänd osmos är mycket effektivt för att avlägsna små laddade lösta ämnen som nitrat, men det kan också ta bort önskvärda näringsämnen, skapa stora volymer avloppsvatten och kräva ökat pumptryck. Jonbyte kan selektivt avlägsna nitrat från vatten utan stora avfallsströmmar,[41] men kräver regenerering och kan möta utmaningar med absorption av oönskade joner.
Se även
[redigera | redigera wikitext]Referenser
[redigera | redigera wikitext]- Den här artikeln är helt eller delvis baserad på material från engelskspråkiga Wikipedia, 22 juli 2024.
Noter
[redigera | redigera wikitext]- ^ Carlson, C. A.; Ingraham, J. L. (1983). ”Comparison of denitrification by Pseudomonas stutzeri, Pseudomonas aeruginosa, and Paracoccus denitrificans”. Appl. Environ. Microbiol. 45 (4): sid. 1247–1253. doi: . PMID 6407395. Bibcode: 1983ApEnM..45.1247C.
- ^ Baalsrud, K.; Baalsrud, Kjellrun S. (1954). ”Studies on Thiobacillus denitrificans”. Archiv für Mikrobiologie 20 (1): sid. 34–62. doi: . PMID 13139524.
- ^ [a b] Zumft, W G (1997). ”Cell biology and molecular basis of denitrification”. Microbiology and Molecular Biology Reviews 61 (4): sid. 533–616. doi: . PMID 9409151.
- ^ Atlas, R.M., Barthas, R. Microbial Ecology: Fundamentals and Applications. 3rd Ed. Benjamin-Cummings Publishing. ISBN 0-8053-0653-6
- ^ Graf, Jon S.; Schorn, Sina; Kitzinger, Katharina; Ahmerkamp, Soeren; Woehle, Christian; Huettel, Bruno; Schubert, Carsten J.; Kuypers, Marcel M. M.; et al. (3 March 2021). ”Anaerobic endosymbiont generates energy for ciliate host by denitrification”. Nature 591 (7850): sid. 445–450. doi: . PMID 33658719. Bibcode: 2021Natur.591..445G.
- ^ An, S.; Gardner, WS (2002). ”Dissimilatory nitrate reduction to ammonium (DNRA) as a nitrogen link, versus denitrification as a sink in a shallow estuary (Laguna Madre/Baffin Bay, Texas)”. Marine Ecology Progress Series 237: sid. 41–50. doi: . Bibcode: 2002MEPS..237...41A.
- ^ Kuypers, MMM; Marchant, HK; Kartal, B (2011). ”The Microbial Nitrogen-Cycling Network”. Nature Reviews Microbiology 1 (1): sid. 1–14. doi: . PMID 29398704.
- ^ Spanning, R., Delgado, M. and Richardson, D. (2005). ”The Nitrogen Cycle: Denitrification and its Relationship to N2 Fixation”. Nitrogen Fixation: Origins, Applications, and Research Progress. sid. 277–342. doi: . ISBN 978-1-4020-3542-5. ”It is possible to encounter DNRA when your source of carbon is a fermentable substrate, as glucose, so if you wanna avoid DNRA use a non fermentable substrate”
- ^ Liu, X.; Tiquia, S. M.; Holguin, G.; Wu, L.; Nold, S. C.; Devol, A. H.; Luo, K.; Palumbo, A. V.; et al. (2003). ”Molecular Diversity of Denitrifying Genes in Continental Margin Sediments within the Oxygen-Deficient Zone off the Pacific Coast of Mexico”. Appl. Environ. Microbiol. 69 (6): sid. 3549–3560. doi: . PMID 12788762. Bibcode: 2003ApEnM..69.3549L.
- ^ Seitzinger, S.; Harrison, J. A.; Bohlke, J. K.; Bouwman, A. F.; Lowrance, R.; Peterson, B.; Tobias, C.; Drecht, G. V. (2006). ”Denitrification Across Landscapes and Waterscapes: A Synthesis”. Ecological Applications 16 (6): sid. 2064–2090. doi: . PMID 17205890.
- ^ Scaglia, J.; Lensi, R.; Chalamet, A. (1985). ”Relationship between photosynthesis and denitrification in planted soil”. Plant and Soil 84 (1): sid. 37–43. doi: . Bibcode: 1985PlSoi..84...37S.
- ^ Korom, Scott F. (1992). ”Natural Denitrification in the Saturated Zone: A Review”. Water Resources Research 28 (6): sid. 1657–1668. doi: . Bibcode: 1992WRR....28.1657K.
- ^ Cornish Shartau, S. L.; Yurkiw, M.; Lin, S.; Grigoryan, A. A.; Lambo, A.; Park, H. S.; Lomans, B. P.; Van Der Biezen, E.; et al. (2010). ”Ammonium Concentrations in Produced Waters from a Mesothermic Oil Field Subjected to Nitrate Injection Decrease through Formation of Denitrifying Biomass and Anammox Activity”. Applied and Environmental Microbiology 76 (15): sid. 4977–4987. doi: . PMID 20562276. Bibcode: 2010ApEnM..76.4977C.
- ^ Merchant (2017). ”Denitrifying community in coastal sediments performs aerobic and anaerobic respiration simultaneously”. The ISME Journal 11 (8): sid. 1799–1812. doi: . PMID 28463234. Bibcode: 2017ISMEJ..11.1799M.
- ^ Qu (2016). ”Transcriptional and metabolic regulation of denitrification in Paracoccus denitrificans allows low but significant activity of nitrous oxide reductase under oxic conditions”. Environmental Microbiology 18 (9): sid. 2951–63. doi: . PMID 26568281. Bibcode: 2016EnvMi..18.2951Q.
- ^ [a b] Ji, Bin; Yang, Kai; Zhu, Lei; Jiang, Yu; Wang, Hongyu; Zhou, Jun; Zhang, Huining (2015). ”Aerobic denitrification: A review of important advances of the last 30 years”. Biotechnology and Bioprocess Engineering 20 (4): sid. 643–651. doi: .
- ^ Saleh-Lakha, Saleema; Shannon, Kelly E.; Henderson, Sherri L.; Goyer, Claudia; Trevors, Jack T.; Zebarth, Bernie J.; Burton, David L. (2009-06-15). ”Effect of pH and Temperature on Denitrification Gene Expression and Activity in Pseudomonas mandelii”. Applied and Environmental Microbiology 75 (12): sid. 3903–3911. doi: . ISSN 0099-2240. PMID 19376915. Bibcode: 2009ApEnM..75.3903S.
- ^ Starr, Robert C.; Gillham, Robert W. (November 1993). ”Denitrification and Organic Carbon Availability in Two Aquifers”. Groundwater 31 (6): sid. 934–947. doi: . ISSN 0017-467X. Bibcode: 1993GrWat..31..934S. https://ngwa.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1745-6584.1993.tb00867.x.
- ^ Sirivedhin, Tanita; Gray, Kimberly A. (February 2006). ”Factors affecting denitrification rates in experimental wetlands: Field and laboratory studies”. Ecological Engineering 26 (2): sid. 167–181. doi: . ISSN 0925-8574. Bibcode: 2006EcEng..26..167S. https://doi.org/10.1016/j.ecoleng.2005.09.001.
- ^ Burgin, Amy J.; Groffman, Peter M.; Lewis, David N. (September 2010). ”Factors Regulating Denitrification in a Riparian Wetland”. Soil Science Society of America Journal 74 (5): sid. 1826–1833. doi: . ISSN 0361-5995. Bibcode: 2010SSASJ..74.1826B. https://acsess.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.2136/sssaj2009.0463.
- ^ Peterjohn, William T.; Schlesinger, William H. (November 1991). ”Factors Controlling Denitrification in a Chihuahuan Desert Ecosystem”. Soil Science Society of America Journal 55 (6): sid. 1694–1701. doi: . ISSN 0361-5995. Bibcode: 1991SSASJ..55.1694P. https://acsess.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.2136/sssaj1991.03615995005500060032x.
- ^ Foltz, Mary E.; Alesso, Agustín; Zilles, Julie L. (2023). ”Field soil properties and experimental nutrient additions drive the nitrous oxide ratio in laboratory denitrification experiments: a systematic review”. Frontiers in Soil Science 3. doi: . ISSN 2673-8619.
- ^ Yang, Xinping; Wang, Shimei; Zhou, Lixiang (January 2012). ”Effect of carbon source, C/N ratio, nitrate and dissolved oxygen concentration on nitrite and ammonium production from denitrification process by Pseudomonas stutzeri D6”. Bioresource Technology 104: sid. 65–72. doi: . ISSN 0960-8524. PMID 22074905. Bibcode: 2012BiTec.104...65Y. https://doi.org/10.1016/j.biortech.2011.10.026.
- ^ Elefsiniotis, P.; Li, D. (2006-02-15). ”The effect of temperature and carbon source on denitrification using volatile fatty acids”. Biochemical Engineering Journal 28 (2): sid. 148–155. doi: . ISSN 1369-703X. Bibcode: 2006BioEJ..28..148E. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1369703X05003463.
- ^ Moloantoa, Karabelo M.; Khetsha, Zenzile P.; Kana, Gueguim E. B.; Maleke, Maleke M.; Van Heerden, Esta; Castillo, Julio C.; Cason, Errol D. (2023). ”Metagenomic assessment of nitrate-contaminated mine wastewaters and optimization of complete denitrification by indigenous enriched bacteria”. Frontiers in Environmental Science 11. doi: . ISSN 2296-665X.
- ^ Deveautour, C.; Rojas-Pinzon, P.A.; Veloso, M.; Rambaud, J.; Duff, A.M.; Wall, D.; Carolan, R.; Philippot, L.; et al. (May 2022). ”Biotic and abiotic predictors of potential N2O emissions from denitrification in Irish grasslands soils: A national-scale field study”. Soil Biology and Biochemistry 168: sid. 108637. doi: . ISSN 0038-0717. https://doi.org/10.1016/j.soilbio.2022.108637.
- ^ Dähnke K.; Thamdrup B. (2013). ”Nitrogen isotope dynamics and fractionation during sedimentary denitrification in Boknis Eck, Baltic Sea”. Biogeosciences 10 (5): sid. 3079–3088. doi: . Bibcode: 2013BGeo...10.3079D.
- ^ Bachand, P. A. M.; Horne, A. J. (1999). ”Denitrification in constructed free-water surface wetlands: II. Effects of vegetation and temperature”. Ecological Engineering 14 (1–2): sid. 17–32. doi: . Bibcode: 1999EcEng..14...17B.
- ^ Martin, T. L.; Kaushik, N. K.; Trevors, J. T.; Whiteley, H. R. (1999). ”Review: Denitrification in temperate climate riparian zones”. Water, Air, and Soil Pollution 111: sid. 171–186. doi: . Bibcode: 1999WASP..111..171M.
- ^ Mulvaney, R. L.; Khan, S. A.; Mulvaney, C. S. (1997). ”Nitrogen fertilizers promote denitrification”. Biology and Fertility of Soils 24 (2): sid. 211–220. doi: . Bibcode: 1997BioFS..24..211M.
- ^ Ghane, E; Fausey, NR; Brown, LC (Jan 2015). ”Modeling nitrate removal in a denitrification bed”. Water Res. 71C: sid. 294–305. doi: . PMID 25638338. Bibcode: 2015WatRe..71..294G. [inloggning kan krävas]
- ^ Carney KN, Rodgers M; Lawlor, PG; Zhan, X (2013). ”Treatment of separated piggery anaerobic digestate liquid using woodchip biofilters”. Environ Technology 34 (5–8): sid. 663–70. doi: . PMID 23837316. Bibcode: 2013EnvTe..34..663C. [inloggning kan krävas]
- ^ Dalsgaard, T.; Thamdrup, B.; Canfield, D. E. (2005). ”Anaerobic ammonium oxidation (anammox) in the marine environment”. Research in Microbiology 156 (4): sid. 457–464. doi: . PMID 15862442.
- ^ Chen, K.-C.; Lin, Y.-F. (1993). ”The relationship between denitrifying bacteria and methanogenic bacteria in a mixed culture system of acclimated sludges”. Water Research 27 (12): sid. 1749–1759. doi: . Bibcode: 1993WatRe..27.1749C.
- ^ Baytshtok, Vladimir; Lu, Huijie; Park, Hongkeun; Kim, Sungpyo; Yu, Ran; Chandran, Kartik (2009-04-15). ”Impact of varying electron donors on the molecular microbial ecology and biokinetics of methylotrophic denitrifying bacteria”. Biotechnology and Bioengineering 102 (6): sid. 1527–1536. doi: . PMID 19097144.
- ^ Lu, Huijie; Chandran, Kartik; Stensel, David (November 2014). ”Microbial ecology of denitrification in biological wastewater treatment”. Water Research 64: sid. 237–254. doi: . PMID 25078442. Bibcode: 2014WatRe..64..237L.
- ^ Constantin, H.; Fick, M. (1997). ”Influence of C-sources on the denitrification rate of a high-nitrate concentrated industrial wastewater”. Water Research 31 (3): sid. 583–589. doi: . Bibcode: 1997WatRe..31..583C.
- ^ Rayaroth, Manoj P.; Aravindakumar, Charuvila T.; Shah, Noor S.; Boczkaj, Grzegorz (2022). ”Advanced oxidation processes (AOPs) based wastewater treatment - unexpected nitration side reactions - a serious environmental issue: A review”. Chemical Engineering Journal (Elsevier BV) 430: sid. 133002. doi: . ISSN 1385-8947. Bibcode: 2022ChEnJ.43033002R.
- ^ Rajmohan, K. S.; Gopinath, M.; Chetty, Raghuram (2016). Review on challenges and opportunities in the removal of nitrate from wastewater using electrochemical method. "37". Triveni Enterprises. sid. 1519–1528. ISSN 2394-0379.
- ^ Ji, Yangyuan; Niu, Junfeng; Xu, Dong; Wang, Kaixuan; Brejcha, Jacob; Jeon, Seunghyo; Warsinger, David M (2021). ”Efficient electrocatalysis for denitrification by using TiO2 nanotube arrays cathode and adding chloride ions”. Chemosphere (Elsevier BV) 274: sid. 129706. doi: . ISSN 0045-6535. PMID 33540319. Bibcode: 2021Chmsp.27429706J. https://docs.lib.purdue.edu/cgi/viewcontent.cgi?article=1047&context=mepubs.
- ^ Krueger, Gordon M. (1949). ”A method for the removal of nitrates from waterprior to use in infant formula”. The Journal of Pediatrics (Elsevier BV) 35 (4): sid. 482–487. doi: . ISSN 0022-3476. PMID 18143940.